دانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي - دانلود رایگان
دانلود رایگان پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوساله ها
دانلود رایگان
| دانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس در گوساله هادانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوساله ها
فهرست
عنوان صفحه
الف- مقدمه.......................................................................................................................... 1
ب-چکيده 3
فصل اول:کليات ................................................................................................................... 5
1- تاريخچه ..................................................................................................................... 6
2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما......................................................................................... 6
3- مقاومت مايکوپلاسماها................................................................................................. 8
4- طبقه بندي مايکوپلاسماها............................................................................................. 9
5- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس...................................................................................... 12
6- فيلوژني........................................................................................................................ 14
7- ساختمان ..................................................................................................................... 15
1-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس ............................................................................... 15
2-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم ....................................................................... 17
8- بيولوژي مولکولي......................................................................................................... 19
9- توالي هاي تکراري.......................................................................................................... 23
10- پروتئينهاي سطحي...................................................................................................... 25
11- فاکتور حدت................................................................................................................ 30
12- آناليز پروتئين .......................................................................................................... 32
13- طبقه بندي سويه ها ..................................................................................................... 34
14- مشخصات گونه مايکوئيدس........................................................................................ 35
15- کشت و رشد گونه مايکوئيدس ................................................................................... 38
16- کشت و رشد گونه کاپري کولوم ................................................................................ 41
1-16- محيط Thiacourt ................................................................................................. 41
17- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان............................................................................ 44
1-17- علائم باليني ........................................................................................................... 45
2-17- علائم کالبدگشايي بيماري ..................................................................................... 47
3-17- پاتوژنز .................................................................................................................. 50
1-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني................................................................... 53
4-17- اختصاصيت ميزبان................................................................................................. 57
5-17- انتقال بيماري ....................................................................................................... 58
6-17- سير همه گيري ........................................................................................................ 59
1-6-17- مخزن.................................................................................................................. 59
2-6-17- راه انتقال............................................................................................................ 59
7-17- پيشگيري و کنترل................................................................................................... 60
1-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري.............................................. 61
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري....................................................................... 62
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي.................................................................... 63
18- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان ............................................................................. 63
1-18- علائم باليني ........................................................................................................... 64
2-18- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 66
19- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم................................................................. 69
1-19- سندروم MASKePs............................................................................................... 70
2-19- علائم باليني............................................................................................................ 71
3-19- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 71
4-19- سندروم آگالاکتيه واگير......................................................................................... 73
20- گونه مايکوپلاسما کاپري ........................................................................................... 73
1-20- بيماريزايي ............................................................................................................. 73
2-20- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 74
21- سير همه گيري.......................................................................................................... 75
1-21-مخزن.................................................................................................................... ...... 75
2-21-راه انتقال.............................................................................................................. 76
3-21-جمعيت ميزبان...................................................................................................... 77
22-پيشگيري وکنترل ..................................................................................................... 77
1-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري............................................. 77
2-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري........................................................................ 78
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي..................................................................... 78
23-واکسن..................................................................................................................... 79
1-23-واکسن MmmLC ................................................................................................ 79
2-23-واکسن Mccp ...................................................................................................... 79
3-23-واکسن Mcc .................. 7979-اختصاصيت ميزبان در کلاستر مايکوئيدس .................. .......................80
25-تشخيص افتراقي........................................................................................................ 80
1-25-شناسايي عامل بيماري زا .................................................................................... ...... 81
1-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي......... 81
2-25- تشخيص آزمايشگاهي ......................................................................................... 81
1-2-25- روش کشت و جداسازي................................................................................... 81
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها ................................................................................................ 82
2-1-2-25- آماده سازي نمونه ها ................................................................................. 82
3-25- تستهاي بيوشيمي................................................................................................ 83
4-25- روشهاي سرولوژي.............................................................................................. 85
1-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي .................................................................... 85
2-4-25- تست مهاري رشد ................................................................................................. 87
3-4-25- تست ايمونو فلورسانس ......................................................................................... 88
4-4-25- تست رسوب ژلي.................................................................................................... 88
5-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان ................................................................................... 89
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون .......................................................................... 89
7-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس.............................................................................. 90
8-4-25- تست اليزاي رقابتي......................................................................................... 91
9-4-25- ساير تستهاي تشخيصي.................................................................................. 94
5-25 - مشکلات روشهاي سنتي...................................................................................... 94
6-25- تشخيص با استفاده از PCR............................................................................... 95
فصل دوم: روش کار
26- روش کار ................................................................................................................ 101
1-26- جمع آوري نمونه ....................................................................................................... 101
1-1-26- مواد لازم................................................................................................................ 101
2-1-26- بخش جمع آوري نمونه.................................................................................... 101
3-1-26- نمونه برداري................................................................................................. 103
2-26- کشت و جداسازي نمونه ها................................................................................... 104
1-2-26- مواد لازم ........................................................................................................ 104
2-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان 106
1-2-2-26- مواد لازم ................................................................................................... 106
2-2-2-26- روش تهيه محيط کشت....................................................................................... 107
3-26- استخراج DNA مايکوپلاسما................................................................................ 109
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي............................................................ 109
4-26- فرايند PCR........................................................................................................ 110
1-4-26- مواد لازم ........................................................................................................ 110
2-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR .................................................................... 112
1-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونه ها ...................................................................... 112
2-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده...................................................... 115
3-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه.............................................................................. 115
3-4-26- پرايمرها.......................................................................................................... 115
4-26- واکنش PCR........................................................................................................ 117
5-26- تهيه ژل الکتروفورز ............................................................................................ 118
1-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد ........................................................................... 119
6-26- الکتروفورز ................................................................................................................ 121
7-26- رويت باندهاي ايجاد شده ................................................................................... 122
فصل سوم: نتايج
27- نتايج ..................................................................................................................... 124
1-27- جداسازي............................................................................................................. 124
1-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت............................................................................ 124
2-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي ....................................................................... 124
1-2-1-27- نتايج روز پنجم ......................................................................................... 125
2-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم.................................................................................. 125
3-2-1-27- نتايج روزپانزدهم........................................................................................ 126
2-27- نتايج PCR ............................................................................................................. 126
1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ............................................................. 126
2-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده............................................................................... 127
3-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس........................................ 127
4-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه................................................ 128
5-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ....................... ...... 129
3-27- نتايج کالبد گشايي............................................................................................... 130
1-3-27- معيار انتخاب .................................................................................................. 130
فصل چهارم: بررسي نتايج
نمودارها ..................................................................................................................... 131
فصل پنجم: بحث
28- بحث ..................................................................................................................... 139
1-28- ضايعات کالبد گشايي................................................................................................. 139
2-28- ميزان وقوع عفونت تنفسي مايکوپلاسما ............................................................. 141
3-28- روش کشت.......................................................................................................... 142
4-28- روش PCR ...................................................................................................... 147
5-28- فراواني گونه ها .................................................................................................. 152
29- خلاصه انگليسي....................................................................................................... 159
30- منابع ..................................................................................................................... 160
تصوير شماره 1: کلوني تخم مرغي شکل مايکوپلاسما پس از سومين ساب کالچر..... 125
تصوير شماره 2:آزمايش PCR براي تشخيص جنس مايکوپلاسما در نمونه ريه..... 127
تصوير شماره 3:آزمايش PCR براي تشخيص کلاستر مايکوئيدس در نمونه ريه.... 128
تصوير شماره 4:آزمايش PCR براي تشخيص گونه آگالاکتيه درنمونه ريه................................................. 129
تصوير شماره 5:آزمايش PCR براي تشخيص گونه مايکوئيدس مايکوئيدس کلوني بزرگ 130
جدول1: طبقه بندي مايکوپلاسما........................................................................................... 11
جدول 2: معرفي اعضا کلاستر مايکوئيدس و خصوصيات بيماريزايي آنها ................... 11
جدول 3: احتياجات غذايي براي رشد مايکوپلاسماهاي کلاستر مايکوئيدس.................... 39
جدول 4 : مقادير موردنياز جهت تهيه مخلوط اصلي اوليه............................................... 112
جدول 5: مواد مورد نياز واکنش تکثير .......................................................................... 114
جدول6 : پرايمرهاي استفاده شده در واکنش تکثير ........................................................ 116
جدول 7 : برنامه واکنش پرايمرها ................................................................................... 118
جدول8: : فرمول تهيه محيط TBE(5X).......................................................................... 120
جدول9: ميزان اتيديوم برومايد مصرفي جهت ساختن مقادير متفاوت ژل ...................... 120
نمودار شماره 1: درصد مايکوپلاسماي جدا شده به روش کشت در عفونت تنفسي
گله هاي مورد مطالعه................................................................................................... 132
نمودارشماره 2: درصد حضور مايکوپلاسما درعفونت تنفسي گله هاي مورد
مطالعه به روشPCR ................................................................................................. 132
نمودار شماره3 : مقايسه روشهاي کشت و PCR در تشخيص مايکوپلاسما ي موجود در عفونت تنفسي گله هاي مورد مطالعه............................................................................................................... 133
نمودار شماره4: مقايسه نتايج کشت وPCR نمونه ها در گله هاي مورد مطالعه (n=100) 133
نمودار شماره 5: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گاو (n=50) ............. 134
نمودار شماره 6: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گوسفند (n=30) 134
نمودار شماره 7: مقايسه نتايج کشت و PCR در گله هاي بز (n=20).......................... 135
نمودار شماره8: نمودار شماره 8:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي مورد مطالعه (n=100) ................................................................................................ 135
نمودار شماره 9: نمودار شماره9:مقايسه نتايج ايجاد کدورت در محيط براث و جداسازي مايکوپلاسما در گله هاي مورد مطالعه (n=100) ................................................................................................ 136
نمودار شماره 10:نمودار شماره10: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گاو(n=50)................................................................................................. 136 نمودار شماره 11:نمودار شماره 11:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي بز (n=20).................................................................................................. 137 نمودار شماره12: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گوسفند (n=30) 137 مقدمه عفونت پلوروپنوموني واگير، بيماري تحليل برنده تنفسي است كه با جاي گرفتن در طبقه بندي بيماريهاي سازمان جهاني كنترل بيماريهاي واگير، لزوم و اهميت شناسايي آن مشخص شده است. عامل اصلي اين بيماري، گونه مايكوپلاسما مايكوئيدس مي باشد كه تايپ كلوني كوچك آن[1] بطور اختصاصي به گله هاي گاو، خسارات فراواني ناشي از همه گيري گسترده و مرگ و مير فراوان تحميل كرده است. تايپ كلوني بزرگ اين گونه[2] همراه با دو گونه ديگر بنامهاي مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم[3]و مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپري[4]فرم غيركلاسيك پلوروپنوموني واگير را در گله هاي گوسفند و بز بوجود آورده اند. اين بيماري در فرم كلاسيك، که عامل آن مايکوپلاسما کاپري کولوم کاپري پنوموني[5] شناخته مي شود، خسارات اقتصادي سهمگيني در گله هاي بز و گوسفند موجب گرديده است. از آنجائيكه منطقه خاورميانه جزو مناطق مشكوك به آلودگي پلوروپنوموني واگير محسوب مي شود، حفظ وضعيت عاري بودن از عفونت در اين منطقه، مشكل يا تقريبا غيرممكن بوده و نيازمند بازنگري درراهبردهاي بكار رفته به منظور تشخيص و كنترل اين عفونت هاست. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك تشخيصي و پاتولوژيكي ، مسير بيماريزايي ناشناخته و تنوع فنوتيپي بسيار پيچيده ارگانيسم در مواجهه با دستگاه ايمني ميزبان، بر مشكل شناسايي آن افزوده است. علاوه بر اين ، ابقا طولاني مدت باکتري در محل عفونت و وجود ناقلين بدون علامت ، برنامه كنترل بيماري را با چالش روبرو كرده است. از اين رو، شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي و تفريقي گونه هاي كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس كه هركدام استراتژي جداگانه اي در برخورد با عفونت گله ها دارند، از اهميت ويژه اي برخوردار است. از آنجايي كه مايكوپلاسماهاي پاتوژن در محيط كشت به سختي رشد مي كنند، استفاده متداول از روش كشت و جداسازي، شناسايي عفونت گله ها را با مشكل روبرو كرده است. از طرف ديگر، عمدتا به دليل تشابه آنتي ژنتيكي بين گونه هاي كلاسترمايكوئيدس و ساير گونه هاي مايكوپلاسما، روشهاي سرولوژي از دقت و ويژگي كافي در تمايز گونه ها برخوردار نيستند. لذا به رهيافت روش هاي مولكولي مانندPCR بعنوان روشي سريع، دقيق و با حساسيت و ويژگي مطلوب در كنترل عفونت گله ها، توجه ويژه اي مي شود. هدف از اين مطالعه، بررسي عفونت هاي تنفسي ناشي از كلاستر مايكوئيدس در گله هاي نشخواركنندگان از طريق كشت و PCR مي باشد. چكيده : كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس در برگيرنده مهمترين پاتوژنهاي تنفسي نشخواركنندگان است كه ساليانه، خسارات اقتصادي سنگيني بر صنعت دامپروري كشورهاي جهان وارد مي كند. اخيرا شيوعهاي بازپديدي از عفونتهاي پلوروپنوموني نشخواركنندگان در منطقه خاورميانه گزارش شده است. در اين شرايط تعيين وضعيت گله هاي كشور از نظر آلودگي به گونه هاي پاتوژن اين كلاستر، از اهميت خاصي برخوردار است. هنوز گزارشي از شناسايي و جداسازي گونه هاي درگير از عفونت پلوروپنوموني در ايران بدست نيامده است. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك در نمونه هاي باليني و دشواريهاي فراوان جداسازي ميكروارگانيسم، به ضرورت شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي جايگزين افزوده است. علاوه بر اين، دستيابي به روشي كاربردي و سريع، در تشخيص عفونتهاي تنفسي گله ها و تخميني از وضعيت عفونت در ايران، مدنظر اين تحقيق بوده است. در اين مطالعه ، 100 نمونه ريه با ضايعات مشكوك به عفونتهاي تنفسي مايكوپلاسمايي از 100 گله مشكوك (50 گله گاو،30 گله گوسفند،20 گله بز) در اطراف كرمانشاه ، در سالهاي 1386-1384 جمع آوري شدند. ضايعات ماکروسکوپي شامل کبدي شدن ريه ها با زخم هاي خاکستري و سفيد(جامد شدن) و ظاهر منقوط با يا بدون فيبرين بودند. نمونه ها در محيط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند.پس از پاساژهاي متعدد،از 23 گله مشکوک،تک کلوني تخم مرغي شکل مايکوپلاسما جداشد(11 گله گاو،8 گله گوسفند،4 گله بز). امادر واكنش, PCR63 گله عفونت مايكوپلاسماي تنفسي نشان دادند (37 گله گاو، 17 گله گوسفند، 9 گله بز). اين امر، مبين اين نكته است كه عليرغم اينكه جداشدن عامل مايكوپلاسمايي از نمونه ها در محيط كشت، اساس تعيين وضعيت عفونت هاي مايكوپلاسمايي قلمداد مي شود، اما سخت رشد بودن گونه هاي مورد مطالعه در محيط كشت و عدم دستيابي سريع به نتيجه، كارآيي اين روش تشخيصي را در پايش متداول عفونت گله ها زير سوال برده است. علاوه بر اين، بكاربردن آنتي بيوتيكهاي متنوع در دوره درمان و از بين رفتن ميكروارگانيسم در خلال جمع آوري نمونه، نتايج رشد در محيط كشت مايكوپلاسما را دستخوش تغيير داده است. از اين رو، استفاده از روشهاي مولكولي PCR بعنوان يك روش كاربردي، حساس و سريع توصيه مي شود. پس از استخراج DNA نمونه ها به روش فنل کلروفورم و جدا كردن نمونه هاي آلوده به مايكوپلاسما از طريق PCR ، با استفاده از پرايمر اختصاصي كلاستر مايكوئيدس نمونه هاي مايكوپلاسمايي تحت واكنش PCR قرار گرفتند. باند bp 548، تنها در نمونه كنترل ( سويه F38) ديده شد. به منظور كنترل روند واكنش، نمونه ها با پرايمر اختصاصي مايكوئيدس كلوني بزرگ و پرايمر اختصاصي آگالاكتيه، به طور جداگانه PCR شدند كه نتيجه اين آزمايش، يافته هاي آزمايش قبلي را تائيد مي كرد. اگر چه اين تحقيق نشان داد كه عامل عفونتهاي تنفسي مشكوك در نمونه هاي مورد مطالعه نمي تواند از گونه هاي كلاستر مايكوئيدس باشد، منتهي تخمين ميزان عفونت در گله هاي مورد مطالعه، احتياج به تحقيقات وسيعتر با جمع آوري تعداد نمونه هاي بيشتر در مطالعات بعدي دارد. فصل اول: كلـــيات 1- تاريخچه عامل اصلي بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان[6] ـ كه امروزه به نام مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس بيوتايپ كلوني كوچك[7] شناخته مي شود- در سال ١٨٩٨ براي اولين بار توسط نوكارد[8] وروكس[9] شناسايي گرديد. در آن زمان، اولين نام نهاده شده بر اين اجرام، پلوروپنوموني بود كه بعد از اين كه اجرامي با خصوصيت مشابه اين ميكروارگانيسم از منابع ديگر به دست آمد، بنام اجرام شبه پلوروپنوموني نام گذاري شد. ٦٠ سال بعد، نواك نام مايكوپلاسما را به عنوان نام ژنريك اجرامي كه فاقد ديواره سلولياند، پيشنهاد كرد (45). ٢- خصوصيات كلي مايكوپلاسما مايكوپلاسماها، جزو كوچك ترين پروكاريوت هايند (μm١٥-٠) كه قادرند از فيلترهاي مخصوص باكتري (μm٤٥-٢٢/٠) عبور كنند. اين اجرام به دليل فقدان ديواره سلولي، اشكال پلي مورفيك دارند و به اشكال كروي (μm٣/٠-٩/٠)، رشته اي (تا μm١)،گلابي شكل، شاخه اي و مارپيچي در زير ميكروسكوپ الكتروني ديده مي شوند. در واقع، بيشتر شبيه به فرم L باكتري ها مي باشند.ارگانيسم از سه ارگانل شامل غشا سلولي، ريبوزوم و مولكول حلقوي DNA تشكيل شده است. تصوير مايكوپلاسما در زير ميكروسكوپ الكتروني، شبيه فيلامان (بطري) است كه از دو انتها طويل شده است. اين اندامك هاي انتهايي[10]، محل اتصال به غشا يوكاريوت است كه داراي يك ساختمان مركزي ميله مانند[11] مي باشد و توسط غشا احاطه شده است (70). مجموعه خصوصياتي مانند عبور از صافي هاي مخصوص پالايش باكتري، عدم حساسيت به آنتي بيوتيك ها و دشواري هاي رشد، آن ها را شبيه به ويروس ها كرده است. ولي وجود محتواي ژنتيكي DNA (٧-٥/١)% و RNA (١٧-٨)% كه توسط غشاي پلاسمايي سه لايه اي حفاظت شده است، سبب تمايز آن ها از ويروس ها، كلاميديا وريكتزياها مي شود. به دليل دارا بودن حداقل ژن هاي لازم براي تكثير مستقل- كه در حدود تا محتواي ژنتيكي E.coli است ـ نيازمند موجودات زنده براي تكثير و زنده ماني نمي باشند (50). ولي به هر حال تعداد كم ژن ها، منجر به رشد بطئي، ونياز قابل توجه به ميزبان براي تامين برخي از مواد مغذي و بقا شده است. به همين علت بسياري از مايکوپلاسماها به عنوان انگل هاي سطحي در غشا مخاطي دستگاه تنفس چشم، ادراري تناسلي، بافت پستاني و مفاصل شناخته شده اند و به ندرت بافت ها را مورد تهاجم قرار مي دهند (47). البته انتشار آن ها به اندام هاي مختلف بيانگر وجود حداقل يك عفونت گذراست. به طور كلي، تنها برخي گونه هاي مايكوپلاسما و احتمالاً سويه هاي خاص، تمايل بيشتري به بعضي بافت ها يا اندام ها دارند، هر چند كه اين تمايل به معناي حذف كامل تمايل به ساير بافت ها نمي باشد. اغلب مايكوپلاسماها، به عنوان آلوده كننده محيط كشت سلولي شناخته مي شوند که تشخيص و کنترل آلودگي آنها مشكل است (50). مايكوپلاسماها با استفاده از توانايي حركت خود كه به صورت سرخوردن است[12]، خود را به سلول هاي هدف مي رسانند. اين حركت كند بوده و تحت تاثير آنتي بادي هاي اختصاصي مهار مي شود (74). بسياري از مايكوپلاسماها، بي هوازي اختياري بوده و بعضي به صورت مطلوب در اتمسفري با ١٠ -٥% CO2 رشد مي كنند. مايكوپلاسماهاي بي هوازي غيرپاتوژن در شكمبه گوسفند و گاو يافت مي شود (2). 3-مقاومت مايكوپلاسماها اين اجرام توانايي توليد ديواره سلولي پلي مورفيك و پپتيدوگليكاني را دارند و از همين رو، به آن ها باكتري هايي با نقص ديواره سلولي[13] اطلاق مي شود. آنتي بيوتيك هايي كه بر روي ديواره سلولي اثر مي كنند،(دسته بتالاکتامز) مانند پني سيلين و سفالوسپورين، آن ها را از بين نمي برند. اگر چه نسبت به آنتي بيوتيك هايي كه بر روي سنتز پروتئين اثر دارند (مانند تتراسايكلين) حساسند، ولي اين آنتي بيوتيك ها در بدن حيوانات زنده زياد موثر نيستند، زيرا گاهي غلظت كافي آن ها به سطح اپي تليومي كه توسط مايكوپلاسماها احاطه شده است، نمي رسد. از خصوصيت مقاوم بودن به پني سيلين و استات تاليم، براي جلوگيري از رشد ميكروب هاي آلوده كننده محيط كشت استفاده مي شود (72). در آزمايش هاي تجربي، مايكوپلاسماها به شوك اسموتيك، ضدعفوني كننده هاي محيطي، الكل، گرما و خشكي، آنتي بادي هاي اختصاصي وکامپلمان حساس مي باشند. دماي °C٥٥ به مدت ١٥ و °C٦٠ به مدت ٥ آن ها را از بين مي برد. براي مثال گونه مايكوئيدس مايكوئيدس در خارج از بدن حيوان بيش از چند ساعت، قادر به ادامه حيات نمي باشد، ولي در محل عفونت تا مدت ها باقي مي ماند. از گاوهايي كه در ١٠ ماه پيش به بيماري پلوروپنوموني واگير مبتلا بوده اند، ميكروارگانيسم جدا شده است (72). سكوستراهاي ريوي منبع بالقوه اي از آلودگي هستندو ارگانيسم را براي زماني به مدت ٣ سال نگهداري مي كنند. به همين علت، كانون هاي عفونت در اكثر موارد، حيوانات بهبود يافته اند. تركيبات ديگر از قبيل جفت و ادرار نيز مي توانند ارگانيسم ها را براي مدت طولاني زنده نگه دارند. گزارش شده است كه يونجه آلوده به ميكروارگانيسم تا مدت ١٢٤ ساعت، قادر به انتقال آلودگي است. هم چنين در ريه منجمد تا چندين ماه و در محيط كشت خشك شده در خلا، چندين سال زنده مي ماند. فنل ١%، فرمالين ٥/٠% و كلريد جيوه ١% به مدت چند دقيقه ميكروارگانيسم را از بين مي برند (44). 4-طبقه بندي مايكوپلاسماها با استفاده از آناليز توالي ژن 16S-rRNA، تصور مي شود كه مايكوپلاسماها در حدود ٦٠٠ ميليون سال قبل با از دست دادن قسمت هاي غير ضروري ژنوم خود، از جمله ژن هاي سنتز ديواره سلولي از باكتري هاي گرم مثبت و مشخصاً كلستريديومها مشتق شده اند (50). از نظر فيلوژني، مايكوپلاسماها به كلاس Mollicutes، رده Mycoplasmatales و خانواده Mycoplasmatacea تعلق دارند. كلاس Mollicutes، بيش از ١٠٠ گونه از مايكوپلاسماهاي گياهان، مهره داران و حشرات را در بر مي گيرد و از ٥ جنس تشكيل شده است كه در ميان آن ها، مايكوپلاسما، اوروپلاسما[14] و آنئروپلاسما[15]، بيشترين ميزبانان را در انسان و حيوان دارا هستند. (جدول٢) بر اساس آناليز توالي قطعه V2 از ژن 16S-rRNA، مايكوپلاسماها به ٤ دسته تقسيم بندي شده اند: ١ـ پنوموني، ٢ـ هومي نيس[16]، ٣ـ اسپيروپلاسما و ٤ـ آئروپلاسما. سه گونه مايكوپلاسماي بيماري زا در انسان، پنوموني، هومي نيس و اوروپلاسما هستند كه به ترتيب اختلالات تنفسي، و يوروجنيتال را به وجود مي آورند.بيماري زاترين گونه ها در نشخواركنندگان، متعلق به كلاستر مايكوئيدس است كه در دسته اسپيروپلاسما جاي گرفته است (9) .اعضا اين كلاستر كه عمدتاً مسئول عفونت هاي تنفسي هستند، از نظر خصوصيات آنتي ژنتيكي و فنوتيپي، وجه اشتراك زيادي دارند كه تمايز و تفكيك آن ها را در تست هاي متعارف آزمايشگاهي با چالش روبه رو مي كند. جدول ٢ به معرفي اعضا اين كلاستر و ميزبانان اصلي آن ها پرداخته است. در ميان اعضا، مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس بيوتايپ كلوني بزرگ[17] و مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري پنوموني[18] از مهم ترين پاتوژن هاي شناخته شده در نشخواركنندگان هستند. بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان و پلوروپنوموني واگير بزان، دو بيماري مطرح شده در فهرست A و B سازمان جهاني كنترل بيماري هاي واگير جانوري اند كه تشخيص و گزارش وقوع آن ها، جهت احراز اقدامات فوري اجباري است (72) جدول ١: طبقه بندي مايکوپلاسما
دریافت فایل جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید |