دانلود رایگان


دانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي - دانلود رایگان



دانلود رایگان پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوساله ها

دانلود رایگان
دانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس در گوساله هادانلود پایان نامه دکترا بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوساله ها فهرست عنوان صفحه الف- مقدمه.......................................................................................................................... 1 ب-چکيده 3 فصل اول:کليات ................................................................................................................... 5 1- تاريخچه ..................................................................................................................... 6 2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما......................................................................................... 6 3- مقاومت مايکوپلاسماها................................................................................................. 8 4- طبقه بندي مايکوپلاسماها............................................................................................. 9 5- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس...................................................................................... 12 6- فيلوژني........................................................................................................................ 14 7- ساختمان ..................................................................................................................... 15 1-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس ............................................................................... 15 2-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم ....................................................................... 17 8- بيولوژي مولکولي......................................................................................................... 19 9- توالي هاي تکراري.......................................................................................................... 23 10- پروتئينهاي سطحي...................................................................................................... 25 11- فاکتور حدت................................................................................................................ 30 12- آناليز پروتئين .......................................................................................................... 32 13- طبقه بندي سويه ها ..................................................................................................... 34 14- مشخصات گونه مايکوئيدس........................................................................................ 35 15- کشت و رشد گونه مايکوئيدس ................................................................................... 38 16- کشت و رشد گونه کاپري کولوم ................................................................................ 41 1-16- محيط Thiacourt ................................................................................................. 41 17- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان............................................................................ 44 1-17- علائم باليني ........................................................................................................... 45 2-17- علائم کالبدگشايي بيماري ..................................................................................... 47 3-17- پاتوژنز .................................................................................................................. 50 1-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني................................................................... 53 4-17- اختصاصيت ميزبان................................................................................................. 57 5-17- انتقال بيماري ....................................................................................................... 58 6-17- سير همه گيري ........................................................................................................ 59 1-6-17- مخزن.................................................................................................................. 59 2-6-17- راه انتقال............................................................................................................ 59 7-17- پيشگيري و کنترل................................................................................................... 60 1-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري.............................................. 61 2-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري....................................................................... 62 3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي.................................................................... 63 18- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان ............................................................................. 63 1-18- علائم باليني ........................................................................................................... 64 2-18- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 66 19- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم................................................................. 69 1-19- سندروم MASKePs............................................................................................... 70 2-19- علائم باليني............................................................................................................ 71 3-19- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 71 4-19- سندروم آگالاکتيه واگير......................................................................................... 73 20- گونه مايکوپلاسما کاپري ........................................................................................... 73 1-20- بيماريزايي ............................................................................................................. 73 2-20- علائم کالبد گشايي.................................................................................................. 74 21- سير همه گيري.......................................................................................................... 75 1-21-مخزن.................................................................................................................... ...... 75 2-21-راه انتقال.............................................................................................................. 76 3-21-جمعيت ميزبان...................................................................................................... 77 22-پيشگيري وکنترل ..................................................................................................... 77 1-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري............................................. 77 2-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري........................................................................ 78 3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي..................................................................... 78 23-واکسن..................................................................................................................... 79 1-23-واکسن MmmLC ................................................................................................ 79 2-23-واکسن Mccp ...................................................................................................... 79 3-23-واکسن Mcc .................. 7979-اختصاصيت ميزبان در کلاستر مايکوئيدس .................. .......................80 25-تشخيص افتراقي........................................................................................................ 80 1-25-شناسايي عامل بيماري زا .................................................................................... ...... 81 1-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي......... 81 2-25- تشخيص آزمايشگاهي ......................................................................................... 81 1-2-25- روش کشت و جداسازي................................................................................... 81 1-1-2-25- انتخاب نمونه ها ................................................................................................ 82 2-1-2-25- آماده سازي نمونه ها ................................................................................. 82 3-25- تستهاي بيوشيمي................................................................................................ 83 4-25- روشهاي سرولوژي.............................................................................................. 85 1-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي .................................................................... 85 2-4-25- تست مهاري رشد ................................................................................................. 87 3-4-25- تست ايمونو فلورسانس ......................................................................................... 88 4-4-25- تست رسوب ژلي.................................................................................................... 88 5-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان ................................................................................... 89 6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون .......................................................................... 89 7-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس.............................................................................. 90 8-4-25- تست اليزاي رقابتي......................................................................................... 91 9-4-25- ساير تستهاي تشخيصي.................................................................................. 94 5-25 - مشکلات روشهاي سنتي...................................................................................... 94 6-25- تشخيص با استفاده از PCR............................................................................... 95 فصل دوم: روش کار 26- روش کار ................................................................................................................ 101 1-26- جمع آوري نمونه ....................................................................................................... 101 1-1-26- مواد لازم................................................................................................................ 101 2-1-26- بخش جمع آوري نمونه.................................................................................... 101 3-1-26- نمونه برداري................................................................................................. 103 2-26- کشت و جداسازي نمونه ها................................................................................... 104 1-2-26- مواد لازم ........................................................................................................ 104 2-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان 106 1-2-2-26- مواد لازم ................................................................................................... 106 2-2-2-26- روش تهيه محيط کشت....................................................................................... 107 3-26- استخراج DNA مايکوپلاسما................................................................................ 109 1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي............................................................ 109 4-26- فرايند PCR........................................................................................................ 110 1-4-26- مواد لازم ........................................................................................................ 110 2-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR .................................................................... 112 1-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونه ها ...................................................................... 112 2-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده...................................................... 115 3-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه.............................................................................. 115 3-4-26- پرايمرها.......................................................................................................... 115 4-26- واکنش PCR........................................................................................................ 117 5-26- تهيه ژل الکتروفورز ............................................................................................ 118 1-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد ........................................................................... 119 6-26- الکتروفورز ................................................................................................................ 121 7-26- رويت باندهاي ايجاد شده ................................................................................... 122 فصل سوم: نتايج 27- نتايج ..................................................................................................................... 124 1-27- جداسازي............................................................................................................. 124 1-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت............................................................................ 124 2-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي ....................................................................... 124 1-2-1-27- نتايج روز پنجم ......................................................................................... 125 2-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم.................................................................................. 125 3-2-1-27- نتايج روزپانزدهم........................................................................................ 126 2-27- نتايج PCR ............................................................................................................. 126 1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ............................................................. 126 2-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده............................................................................... 127 3-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس........................................ 127 4-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه................................................ 128 5-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ....................... ...... 129 3-27- نتايج کالبد گشايي............................................................................................... 130 1-3-27- معيار انتخاب .................................................................................................. 130 فصل چهارم: بررسي نتايج نمودارها ..................................................................................................................... 131 فصل پنجم: بحث 28- بحث ..................................................................................................................... 139 1-28- ضايعات کالبد گشايي................................................................................................. 139 2-28- ميزان وقوع عفونت تنفسي مايکوپلاسما ............................................................. 141 3-28- روش کشت.......................................................................................................... 142 4-28- روش PCR ...................................................................................................... 147 5-28- فراواني گونه ها .................................................................................................. 152 29- خلاصه انگليسي....................................................................................................... 159 30- منابع ..................................................................................................................... 160 تصوير شماره 1: کلوني تخم مرغي شکل مايکوپلاسما پس از سومين ساب کالچر..... 125 تصوير شماره 2:آزمايش PCR براي تشخيص جنس مايکوپلاسما در نمونه ريه..... 127 تصوير شماره 3:آزمايش PCR براي تشخيص کلاستر مايکوئيدس در نمونه ريه.... 128 تصوير شماره 4:آزمايش PCR براي تشخيص گونه آگالاکتيه درنمونه ريه................................................. 129 تصوير شماره 5:آزمايش PCR براي تشخيص گونه مايکوئيدس مايکوئيدس کلوني بزرگ 130 جدول1: طبقه بندي مايکوپلاسما........................................................................................... 11 جدول 2: معرفي اعضا کلاستر مايکوئيدس و خصوصيات بيماريزايي آنها ................... 11 جدول 3: احتياجات غذايي براي رشد مايکوپلاسماهاي کلاستر مايکوئيدس.................... 39 جدول 4 : مقادير موردنياز جهت تهيه مخلوط اصلي اوليه............................................... 112 جدول 5: مواد مورد نياز واکنش تکثير .......................................................................... 114 جدول6 : پرايمرهاي استفاده شده در واکنش تکثير ........................................................ 116 جدول 7 : برنامه واکنش پرايمرها ................................................................................... 118 جدول8: : فرمول تهيه محيط TBE(5X).......................................................................... 120 جدول9: ميزان اتيديوم برومايد مصرفي جهت ساختن مقادير متفاوت ژل ...................... 120 نمودار شماره 1: درصد مايکوپلاسماي جدا شده به روش کشت در عفونت تنفسي گله هاي مورد مطالعه................................................................................................... 132 نمودارشماره 2: درصد حضور مايکوپلاسما درعفونت تنفسي گله هاي مورد مطالعه به روشPCR ................................................................................................. 132 نمودار شماره3 : مقايسه روشهاي کشت و PCR در تشخيص مايکوپلاسما ي موجود در عفونت تنفسي گله هاي مورد مطالعه............................................................................................................... 133 نمودار شماره4: مقايسه نتايج کشت وPCR نمونه ها در گله هاي مورد مطالعه (n=100) 133 نمودار شماره 5: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گاو (n=50) ............. 134 نمودار شماره 6: مقايسه نتايج کشت و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گوسفند (n=30) 134 نمودار شماره 7: مقايسه نتايج کشت و PCR در گله هاي بز (n=20).......................... 135 نمودار شماره8: نمودار شماره 8:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي مورد مطالعه (n=100) ................................................................................................ 135 نمودار شماره 9: نمودار شماره9:مقايسه نتايج ايجاد کدورت در محيط براث و جداسازي مايکوپلاسما در گله هاي مورد مطالعه (n=100) ................................................................................................ 136 نمودار شماره 10:نمودار شماره10: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما
در گله هاي گاو(
n=50)................................................................................................. 136 نمودار شماره 11:نمودار شماره 11:مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما
در گله هاي بز (
n=20).................................................................................................. 137 نمودار شماره12: مقايسه نتايج تشکيل کدورت در محيط براث و PCR مايکوپلاسما در گله هاي گوسفند (n=30) 137 مقدمه عفونت پلوروپنوموني واگير، بيماري تحليل برنده تنفسي است كه با جاي گرفتن در طبقه بندي بيماريهاي سازمان جهاني كنترل بيماريهاي واگير، لزوم و اهميت شناسايي آن مشخص شده است. عامل اصلي اين بيماري، گونه مايكوپلاسما مايكوئيدس مي باشد كه تايپ كلوني كوچك آن[1] بطور اختصاصي به گله هاي گاو، خسارات فراواني ناشي از همه گيري گسترده و مرگ و مير فراوان تحميل كرده است. تايپ كلوني بزرگ اين گونه[2] همراه با دو گونه ديگر بنامهاي مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم[3]و مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپري[4]فرم غيركلاسيك پلوروپنوموني واگير را در گله هاي گوسفند و بز بوجود آورده اند. اين بيماري در فرم كلاسيك، که عامل آن مايکوپلاسما کاپري کولوم کاپري پنوموني[5] شناخته مي شود، خسارات اقتصادي سهمگيني در گله هاي بز و گوسفند موجب گرديده است. از آنجائيكه منطقه خاورميانه جزو مناطق مشكوك به آلودگي پلوروپنوموني واگير محسوب مي شود، حفظ وضعيت عاري بودن از عفونت در اين منطقه، مشكل يا تقريبا غيرممكن بوده و نيازمند بازنگري درراهبردهاي بكار رفته به منظور تشخيص و كنترل اين عفونت هاست. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك تشخيصي و پاتولوژيكي ، مسير بيماريزايي ناشناخته و تنوع فنوتيپي بسيار پيچيده ارگانيسم در مواجهه با دستگاه ايمني ميزبان، بر مشكل شناسايي آن افزوده است. علاوه بر اين ، ابقا طولاني مدت باکتري در محل عفونت و وجود ناقلين بدون علامت ، برنامه كنترل بيماري را با چالش روبرو كرده است. از اين رو، شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي و تفريقي گونه هاي كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس كه هركدام استراتژي جداگانه اي در برخورد با عفونت گله ها دارند، از اهميت ويژه اي برخوردار است. از آنجايي كه مايكوپلاسماهاي پاتوژن در محيط كشت به سختي رشد مي كنند، استفاده متداول از روش كشت و جداسازي، شناسايي عفونت گله ها را با مشكل روبرو كرده است. از طرف ديگر، عمدتا به دليل تشابه آنتي ژنتيكي بين گونه هاي كلاسترمايكوئيدس و ساير گونه هاي مايكوپلاسما، روشهاي سرولوژي از دقت و ويژگي كافي در تمايز گونه ها برخوردار نيستند. لذا به رهيافت روش هاي مولكولي مانندPCR بعنوان روشي سريع، دقيق و با حساسيت و ويژگي مطلوب در كنترل عفونت گله ها، توجه ويژه اي مي شود. هدف از اين مطالعه، بررسي عفونت هاي تنفسي ناشي از كلاستر مايكوئيدس در گله هاي نشخواركنندگان از طريق كشت و PCR مي باشد. چكيده : كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس در برگيرنده مهمترين پاتوژنهاي تنفسي نشخواركنندگان است كه ساليانه، خسارات اقتصادي سنگيني بر صنعت دامپروري كشورهاي جهان وارد مي كند. اخيرا شيوعهاي بازپديدي از عفونتهاي پلوروپنوموني نشخواركنندگان در منطقه خاورميانه گزارش شده است. در اين شرايط تعيين وضعيت گله هاي كشور از نظر آلودگي به گونه هاي پاتوژن اين كلاستر، از اهميت خاصي برخوردار است. هنوز گزارشي از شناسايي و جداسازي گونه هاي درگير از عفونت پلوروپنوموني در ايران بدست نيامده است. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك در نمونه هاي باليني و دشواريهاي فراوان جداسازي ميكروارگانيسم، به ضرورت شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي جايگزين افزوده است. علاوه بر اين، دستيابي به روشي كاربردي و سريع، در تشخيص عفونتهاي تنفسي گله ها و تخميني از وضعيت عفونت در ايران، مدنظر اين تحقيق بوده است. در اين مطالعه ، 100 نمونه ريه با ضايعات مشكوك به عفونتهاي تنفسي مايكوپلاسمايي از 100 گله مشكوك (50 گله گاو،30 گله گوسفند،20 گله بز) در اطراف كرمانشاه ، در سالهاي 1386-1384 جمع آوري شدند. ضايعات ماکروسکوپي شامل کبدي شدن ريه ها با زخم هاي خاکستري و سفيد(جامد شدن) و ظاهر منقوط با يا بدون فيبرين بودند. نمونه ها در محيط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند.پس از پاساژهاي متعدد،از 23 گله مشکوک،تک کلوني تخم مرغي شکل مايکوپلاسما جداشد(11 گله گاو،8 گله گوسفند،4 گله بز). امادر واكنش, PCR63 گله عفونت مايكوپلاسماي تنفسي نشان دادند (37 گله گاو، 17 گله گوسفند، 9 گله بز). اين امر، مبين اين نكته است كه عليرغم اينكه جداشدن عامل مايكوپلاسمايي از نمونه ها در محيط كشت، اساس تعيين وضعيت عفونت هاي مايكوپلاسمايي قلمداد مي شود، اما سخت رشد بودن گونه هاي مورد مطالعه در محيط كشت و عدم دستيابي سريع به نتيجه، كارآيي اين روش تشخيصي را در پايش متداول عفونت گله ها زير سوال برده است. علاوه بر اين، بكاربردن آنتي بيوتيكهاي متنوع در دوره درمان و از بين رفتن ميكروارگانيسم در خلال جمع آوري نمونه، نتايج رشد در محيط كشت مايكوپلاسما را دستخوش تغيير داده است. از اين رو، استفاده از روشهاي مولكولي PCR بعنوان يك روش كاربردي، حساس و سريع توصيه مي شود. پس از استخراج DNA نمونه ها به روش فنل کلروفورم و جدا كردن نمونه هاي آلوده به مايكوپلاسما از طريق PCR ، با استفاده از پرايمر اختصاصي كلاستر مايكوئيدس نمونه هاي مايكوپلاسمايي تحت واكنش PCR قرار گرفتند. باند bp 548، تنها در نمونه كنترل ( سويه F38) ديده شد. به منظور كنترل روند واكنش، نمونه ها با پرايمر اختصاصي مايكوئيدس كلوني بزرگ و پرايمر اختصاصي آگالاكتيه، به طور جداگانه PCR شدند كه نتيجه اين آزمايش، يافته هاي آزمايش قبلي را تائيد مي كرد. اگر چه اين تحقيق نشان داد كه عامل عفونتهاي تنفسي مشكوك در نمونه هاي مورد مطالعه نمي تواند از گونه هاي كلاستر مايكوئيدس باشد، منتهي تخمين ميزان عفونت در گله هاي مورد مطالعه، احتياج به تحقيقات وسيعتر با جمع آوري تعداد نمونه هاي بيشتر در مطالعات بعدي دارد. فصل اول: كلـــيات 1- تاريخچه عامل اصلي بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان[6] ـ كه امروزه به نام مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس بيوتايپ كلوني كوچك[7] شناخته مي شود- در سال ١٨٩٨ براي اولين بار توسط نوكارد[8] وروكس[9] شناسايي گرديد. در آن زمان، اولين نام نهاده شده بر اين اجرام، پلوروپنوموني بود كه بعد از اين كه اجرامي با خصوصيت مشابه اين ميكروارگانيسم از منابع ديگر به دست آمد، بنام اجرام شبه پلوروپنوموني نام گذاري شد. ٦٠ سال بعد، نواك نام مايكوپلاسما را به عنوان نام ژنريك اجرامي كه فاقد ديواره سلولياند، پيشنهاد كرد (45). ٢- خصوصيات كلي مايكوپلاسما مايكوپلاسماها، جزو كوچك ترين پروكاريوت هايند (μm١٥-٠) كه قادرند از فيلترهاي مخصوص باكتري (μm٤٥-٢٢/٠) عبور كنند. اين اجرام به دليل فقدان ديواره سلولي، اشكال پلي مورفيك دارند و به اشكال كروي (μm٣/٠-٩/٠)، رشته اي (تا μm١)،گلابي شكل، شاخه اي و مارپيچي در زير ميكروسكوپ الكتروني ديده مي شوند. در واقع، بيشتر شبيه به فرم L باكتري ها مي باشند.ارگانيسم از سه ارگانل شامل غشا سلولي، ريبوزوم و مولكول حلقوي DNA تشكيل شده است. تصوير مايكوپلاسما در زير ميكروسكوپ الكتروني، شبيه فيلامان (بطري) است كه از دو انتها طويل شده است. اين اندامك هاي انتهايي[10]، محل اتصال به غشا يوكاريوت است كه داراي يك ساختمان مركزي ميله مانند[11] مي باشد و توسط غشا احاطه شده است (70). مجموعه خصوصياتي مانند عبور از صافي هاي مخصوص پالايش باكتري، عدم حساسيت به آنتي بيوتيك ها و دشواري هاي رشد، آن ها را شبيه به ويروس ها كرده است. ولي وجود محتواي ژنتيكي DNA (٧-٥/١)% و RNA (١٧-٨)% كه توسط غشاي پلاسمايي سه لايه اي حفاظت شده است، سبب تمايز آن ها از ويروس ها، كلاميديا وريكتزياها مي شود. به دليل دارا بودن حداقل ژن هاي لازم براي تكثير مستقل- كه در حدود تا محتواي ژنتيكي E.coli است ـ نيازمند موجودات زنده براي تكثير و زنده ماني نمي باشند (50). ولي به هر حال تعداد كم ژن ها، منجر به رشد بطئي، ونياز قابل توجه به ميزبان براي تامين برخي از مواد مغذي و بقا شده است. به همين علت بسياري از مايکوپلاسماها به عنوان انگل هاي سطحي در غشا مخاطي دستگاه تنفس چشم، ادراري تناسلي، بافت پستاني و مفاصل شناخته شده اند و به ندرت بافت ها را مورد تهاجم قرار مي دهند (47). البته انتشار آن ها به اندام هاي مختلف بيانگر وجود حداقل يك عفونت گذراست. به طور كلي، تنها برخي گونه هاي مايكوپلاسما و احتمالاً سويه هاي خاص، تمايل بيشتري به بعضي بافت ها يا اندام ها دارند، هر چند كه اين تمايل به معناي حذف كامل تمايل به ساير بافت ها نمي باشد. اغلب مايكوپلاسماها، به عنوان آلوده كننده محيط كشت سلولي شناخته مي شوند که تشخيص و کنترل آلودگي آنها مشكل است (50). مايكوپلاسماها با استفاده از توانايي حركت خود كه به صورت سرخوردن است[12]، خود را به سلول هاي هدف مي رسانند. اين حركت كند بوده و تحت تاثير آنتي بادي هاي اختصاصي مهار مي شود (74). بسياري از مايكوپلاسماها، بي هوازي اختياري بوده و بعضي به صورت مطلوب در اتمسفري با ١٠ -٥% CO2 رشد مي كنند. مايكوپلاسماهاي بي هوازي غيرپاتوژن در شكمبه گوسفند و گاو يافت مي شود (2). 3-مقاومت مايكوپلاسماها اين اجرام توانايي توليد ديواره سلولي پلي مورفيك و پپتيدوگليكاني را دارند و از همين رو، به آن ها باكتري هايي با نقص ديواره سلولي[13] اطلاق مي شود. آنتي بيوتيك هايي كه بر روي ديواره سلولي اثر مي كنند،(دسته بتالاکتامز) مانند پني سيلين و سفالوسپورين، آن ها را از بين نمي برند. اگر چه نسبت به آنتي بيوتيك هايي كه بر روي سنتز پروتئين اثر دارند (مانند تتراسايكلين) حساسند، ولي اين آنتي بيوتيك ها در بدن حيوانات زنده زياد موثر نيستند، زيرا گاهي غلظت كافي آن ها به سطح اپي تليومي كه توسط مايكوپلاسماها احاطه شده است، نمي رسد. از خصوصيت مقاوم بودن به پني سيلين و استات تاليم، براي جلوگيري از رشد ميكروب هاي آلوده كننده محيط كشت استفاده مي شود (72). در آزمايش هاي تجربي، مايكوپلاسماها به شوك اسموتيك، ضدعفوني كننده هاي محيطي، الكل، گرما و خشكي، آنتي بادي هاي اختصاصي وکامپلمان حساس مي باشند. دماي °C٥٥ به مدت ١٥ و °C٦٠ به مدت ٥ آن ها را از بين مي برد. براي مثال گونه مايكوئيدس مايكوئيدس در خارج از بدن حيوان بيش از چند ساعت، قادر به ادامه حيات نمي باشد، ولي در محل عفونت تا مدت ها باقي مي ماند. از گاوهايي كه در ١٠ ماه پيش به بيماري پلوروپنوموني واگير مبتلا بوده اند، ميكروارگانيسم جدا شده است (72). سكوستراهاي ريوي منبع بالقوه اي از آلودگي هستندو ارگانيسم را براي زماني به مدت ٣ سال نگهداري مي كنند. به همين علت، كانون هاي عفونت در اكثر موارد، حيوانات بهبود يافته اند. تركيبات ديگر از قبيل جفت و ادرار نيز مي توانند ارگانيسم ها را براي مدت طولاني زنده نگه دارند. گزارش شده است كه يونجه آلوده به ميكروارگانيسم تا مدت ١٢٤ ساعت، قادر به انتقال آلودگي است. هم چنين در ريه منجمد تا چندين ماه و در محيط كشت خشك شده در خلا، چندين سال زنده مي ماند. فنل ١%، فرمالين ٥/٠% و كلريد جيوه ١% به مدت چند دقيقه ميكروارگانيسم را از بين مي برند (44). 4-طبقه بندي مايكوپلاسماها با استفاده از آناليز توالي ژن 16S-rRNA، تصور مي شود كه مايكوپلاسماها در حدود ٦٠٠ ميليون سال قبل با از دست دادن قسمت هاي غير ضروري ژنوم خود، از جمله ژن هاي سنتز ديواره سلولي از باكتري هاي گرم مثبت و مشخصاً كلستريديومها مشتق شده اند (50). از نظر فيلوژني، مايكوپلاسماها به كلاس Mollicutes، رده Mycoplasmatales و خانواده Mycoplasmatacea تعلق دارند. كلاس Mollicutes، بيش از ١٠٠ گونه از مايكوپلاسماهاي گياهان، مهره داران و حشرات را در بر مي گيرد و از ٥ جنس تشكيل شده است كه در ميان آن ها، مايكوپلاسما، اوروپلاسما[14] و آنئروپلاسما[15]، بيشترين ميزبانان را در انسان و حيوان دارا هستند. (جدول٢) بر اساس آناليز توالي قطعه V2 از ژن 16S-rRNA، مايكوپلاسماها به ٤ دسته تقسيم بندي شده اند: ١ـ پنوموني، ٢ـ هومي نيس[16]، ٣ـ اسپيروپلاسما و ٤ـ آئروپلاسما. سه گونه مايكوپلاسماي بيماري زا در انسان، پنوموني، هومي نيس و اوروپلاسما هستند كه به ترتيب اختلالات تنفسي، و يوروجنيتال را به وجود مي آورند.بيماري زاترين گونه ها در نشخواركنندگان، متعلق به كلاستر مايكوئيدس است كه در دسته اسپيروپلاسما جاي گرفته است (9) .اعضا اين كلاستر كه عمدتاً مسئول عفونت هاي تنفسي هستند، از نظر خصوصيات آنتي ژنتيكي و فنوتيپي، وجه اشتراك زيادي دارند كه تمايز و تفكيك آن ها را در تست هاي متعارف آزمايشگاهي با چالش روبه رو مي كند. جدول ٢ به معرفي اعضا اين كلاستر و ميزبانان اصلي آن ها پرداخته است. در ميان اعضا، مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس بيوتايپ كلوني بزرگ[17] و مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري پنوموني[18] از مهم ترين پاتوژن هاي شناخته شده در نشخواركنندگان هستند. بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان و پلوروپنوموني واگير بزان، دو بيماري مطرح شده در فهرست A و B سازمان جهاني كنترل بيماري هاي واگير جانوري اند كه تشخيص و گزارش وقوع آن ها، جهت احراز اقدامات فوري اجباري است (72) جدول ١: طبقه بندي مايکوپلاسما
Mycoplasmatacea Family:
Mycoplasmatales Order:
Mollicutes Class:
Mycoplasma Genus:
جدول ٢:معرفي اعضا کلاستر مايکوييدس و خصوصيات بيماريزاييآنها
بيماري زايي ميزبان اصلي نام ميكروارگانيسم
Contagious Bovine Pleuro Pneumonia (CBPP) گاو 1) Mycoplasma mycoides mycoides Small Colony (MmmSC)
MASKePs Syndrome بز 2) Mycoplasma mycoides mycoides Large Colony (MmmLC)
MASKePs Syndrome بز، گوسفند 3)Mycoplasma mycoides capri (Mmc)
MASKePs Syndrome بز، گوسفند 4) Mycoplasma capricolum Capricolum (Mcc)
Contagious Caprine Pleuro Pneumonia (CCPP) بز 5) Mycoplasma capricolum capripneumonia (Mccp)
Unknown گاو 6) Mycoplasma Bovine Serotype 7
ساپروفيت جوندگان 7) Mycoplasma cowetti
ساپروفيت موجودات زنده 8) Mycoplasma yeasti
Mastitis,Arthritis,CA موجودات زنده 9) Mycoplasma putrificans
5-طبقه بندي كلاستر مايكوئيدس اعضا اين كلاستر شامل مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس كلوني كوچك (MmmSC)، مايكوپلاسما مايكوئيدس مايكوئيدس كلوني بزرگ (MmmLC)، مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري پنوموني (Mccp)، مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم (Mcc)، مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپري (Mmc)، سروتيپ ٧ سويه گاوي (M.bsg7)، مايكوپلاسما پوتري فيكنس (M.putrificans)، مايكوپلاسما كووتي (M.cowetti) و مايكوپلاسما يستي (M.yeasti) مي باشند. دو گونه آخر جز مايكوپلاسماهاي ساپروفيت اند كه بيماري زايي آن ها در شرايط عادي در نشخواركنندگان نامعلوم است و پوتري فيكنس از مبتلايان به سندروم نقص ايمني انسان نيز جدا شده است (47). خسارات اقتصادي ناشي از بيماري زايي و حضور اعضا اين كلاستر در نشخواركنندگان، از اهميت زيادي برخوردار است، به طوري كه بيماري ناشي ازMmmSC -پلوروپنوموني واگير گاوان (CBPP)- از مهم ترين معضلات مطرح اقتصادي در صنعت دامپروري در آفريقا و اخيراً در اروپاست كه براي ساليان متمادي كشورهاي زيادي را درگير كرده است)45). هم چنين در حال حاضر، پلوروپنوموني واگير بزان (CCPP)، بيشترين خسارات اقتصادي را در آفريقا ايجاد مي كند كه پس از طاعون نشخواركنندگان كوچك[19]، دومين بيماري قابل توجه را در گله هاي بز را به وجود آورده است (17). MmmLC،Mcc و Mmc سندروم MASKePs[20] را در گله هاي گوسفند و بز ايجاد مي كنند كه متداول ترين تظاهرات بيماري با تورم پستان باليني، التهاب مفصل، سپتي سمي، تورم قرنيه و پلوروپنوموني در بالغين همراه است. در بزغاله ها پنوموني، سپتي سمي و التهاب عمومي مفاصل در اين سندروم ديده مي شود (52). بيماري زايي bsg7 يا Msp7 كه در عفونتهاي همزمان با سويه P650 آغاز مي شود، هنوز در دست تحقيق است. اخيراً همه گيري هايي در گله هاي گاو با علايم سقط، التهاب مفاصل و تورم پستان در استراليا ديده شده كه اين عامل از آن ها جدا گرديده است (26). گونه پوتري فيكنس عامل تورم پستان والتهاب مفاصل شناخته شده، ولي آنتي ژنيستي اين گونه و M.cowetti و M.yeasti با ساير اعضا كلاستر به طور بارزي متفاوت است، لذا به طور معمول به عنوان اعضا كلاسيك كلاستر مايكوئيدس محسوب نمي شوند. به هر حال، آناليز فيلوژني ژن 16S-rRNA، آن ها را در يك كلاستر قرار داده و نشان داده است كه قرابت ژنتيكي گونه هاي cowetti و yeasti، ٧/٩٩% و با پوتري فيكانس ٩/٩٨% است (52). 6-فيلوژني اولين قدم در طبقه بندي موليكيوتها به وسيله روش هاي ملكولي و ايمني شناسي برداشته ميشود. تاکنون اطلاعات تاكسونومي با ارزشي به دست آمده است، اما از روند تكامل اطلاعات زيادي در دست نميباشد. اخيراً، بررسي ارتباط هاي فيلوژني موليكيوتها بر روي مناطق ريبوزومي RNA كه بسيار حفاظت شده است، متمركز گرديده است. اين مناطق حفاظت شده به نسبت كل ژنوم مايكوپلاسما، بسيار كمتر دستخوش تغيير مي شوند. امروزه توالي كامل ٤٥٠ باكتري، شناخته شده است (50). ويسبرگ[21] در مطالعه اي، توالي كامل ژن16S-rRNA را در بالغ از ٤٠ گونه موليكيوتها و باكتري هاي ديواره دار تعيين كرد. اين تحقيقات نشان داد كه موليكيوتها در گروه استرپتوكوكوس ـ لاكتوباسيل ـ باسيل كه باكتري هاي G+با محتواي اندک G+C هستند، قرار ميگيرند و ازنياکان كلستريديوم ها مشتق شده اند. آناليز توالي ژنrRNA نشان مي دهد كه گونه هاي Mmm و M.capricolum متعلق به يكي از ٥ گروه موليكيوتهاهستند كه در دسته اسپيروپلاسماها جای گرفته اند (71).نتيجه اين انشعاب، كاهش در سايز 1000KD ژنوم به KD٥٠٠ در جنس مايكوپلاسما و اوروپلاسما است (47). 7-ساختمان 1-7- ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس مانند ساير موليكيوتها، Mmm در خلال تكامل، ژن هاي سازنده ديواره سلولي خود را از دست داده و يك غشا سه لايه اي، جسم سلولي را كه شامل عناصر ريبوزومي و محتويات هسته می باشد، محدود كرده است. اندامك انتهايي آن كه به مرحله اتصال و چسبيدن ارتباط دارد، برخلاف گونه گاليناروم و پنوموني در Mmm شناخته نشده است. به هر حال رادول[22] از يك ارگانل داخل سيتوپلاسمي كه تا گوشه ها امتداد يافته است، نام برده است. اين ارگانل، تنها در شرايط توني سيتي شديد و منابع غير محدود انرژي تشكيل مي شود و اهميت آن نامعلوم است (71). به جاي ديواره پپتيدوگليکاني ساير باكتري ها، Mmm داراي يك ساختار كپسول مانند است كه از غشا يك لايه اي به ضخامت ٣٠ نانومتر تشكيل شده است. آناليز شيميايي نشان داده است كه اين كپسول حاوي گالاكتان، پلي مري از جنس مونوساكاريد گالاكتوز ، و باندهاي B(1-6) است. اين كپسول، ٩٠% از كل ساختمان كربوهيدراتي از مايكوپلاسماي رشد كرده در محيط كشت را تشكيل مي دهد که با افزايش سرعت رشد و غلظت گلوكز، توليد آن افزايش مي يابد. كپسول گالاكتان در محيط براث و بافت هاي حيوان مبتلا، به صورت شعاعي انتشار مي يابد و در عفونت هاي شديد درگردش خون، ريه، مايع پلور، و ادرار در مقادير زياد يافت مي شود (71). كپسول گالاكتان داراي دترمينانت هاي آنتي ژنتيكي است كه با ويروس واكسينا و پلي ساكاريدهاي ساير باكتري ها، گياهان و حتي بافت نرمال ريه تشابه آنتي ژنتيكي دارد. به نظر مي آيد ساختار كپسول، در بين ساير اعضا كلاستر متفاوت باشد ، پلي ساكاريدي كه از Mmc به دست آمده شامل گلوكان و پلي مري ازگلوكز بوده، درحاليکه Mccp از مقادير مساوي گلوكز، گالاكتوز، مانوز، فوكوز، گالاكتوز آمين و گلوكز آمين تشکيل يافته است. ليپيدها در غشا سيتوپلاسمي موليكيوتها به طور گسترده اي قرار گرفته اند، بطوري كه ٣٥-٢٥% وزن غشا آن را تشكيل مي دهند. Mmm داراي ليپوگليكاني است كه تا ١٠% وزن غشا را تشكيل مي دهد. ليپوگليكان هاي موليكيوتها محكم به غشا چسبيده اند، ولي در Mmm و ساير سويه هاي وابسته، در مقادير زياد در محيط كشت به صورت آزاد يافت مي شوند. احتمال دارد كه ساختار تب زاي Mmm از ليپوگليكان تشكيل يافته باشد. تحقيقات نشان مي دهد كه از اين ساختار كپسول در تهيه واكسن موثر بر عليه MmmSC در موش استفاده مي شود. اين واكسن ها داراي كووالانت و تركيبات پلي ساكاريدي كپسول هستند كه به صورت كونژوگه و غير كونژوگه به كار رفته اند (72). هنگام رشد در محيط براث، اين رشته ها به صورت ماكروسكوپي قابل ديدن است و ممكن است نقشي در اتصال مايكوپلاسما داشته باشد. در مطالعاتي كه بر روي مكانيسمهاي متابوليسم داخلي سلول MmmSC انجام شده است ،سيگنال هاي القا شده در مسير تشخيص به وسيله رسپتورها مورد بررسي قرار گرفته اند. نتايج نشان مي دهند كه بر خلاف ساير ارگانيسم ها، سيستم SRP RNA و دامنه M از Fft براي القا فعاليت GTPase در MmmSC ضروري نمي باشد (71). 2-7-ساختمان مايكوپلاسما كاپري كولوم ژنوم مايكوپلاسما كاپري كولوم حلقوي است كه اندازه اي در حدود kb٥/١١٥٥ دارد. ٢٥% محتواي ژنتيكي آن، از بازهاي G+C تشكيل شده است كه در مقايسه با ساير ميكروارگانيسم ها، بسيار اندك است. اين ميكروارگانيسم تنها داراي يك كروموزوم است. با وجود آن كه حضور پلاسميد در ساير گونه هاي مايكوپلاسما غير معمول است، در اين ميكروارگانيسم پلاسميدي به ابعاد kb٨/١-١/١ وجود دارد. به نظر ميرسد نقش اين DNA خارج كروموزومي، ايجاد مقاومت به آنتي بيوتيك ها است. چرا كه در گله هايي كه تحت درمان با آنتي بيوتيك ها بوده اند، اين پلاسميدغالبا يافت شده است (32). تعداد صفحات:170 متن کامل را می توانید دانلود نمائید چون فقط تکه هایی از متن در این صفحه درج شده (به طور نمونه) و ممکن است به دلیل انتقال به صفحه وب بعضی کلمات و جداول و اشکال پراکنده شده یا در صفحه قرار نگرفته باشد که در فایل دانلودی متن کامل و بدون پراکندگی با فرمت وردwordکه قابل ویرایش و کپی کردن می باشند موجود است.

دریافت فایل
جهت کپی مطلب از ctrl+A استفاده نمایید نماید




پایان نامه دامپزشکی


پایان نامه دکترا دامپزشکی


مقاله دامپزشکی


عفونت ريوي مايكوپلاسمايي


مايكوپلاسما مايكوئيديس واريته


مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته


واريته كاپري كولوم گوساله ها


طبقه بندي سويه‌ها


پلوروپنوموني واگير گاوها


سندروم آگالاکتيه واگير


مقاله


پاورپوینت


فایل فلش


کارآموزی


گزارش تخصصی


اقدام پژوهی


درس پژوهی


جزوه


خلاصه


پایان نامه کارشناسی ارشد پزشکی و بهداشت

دانلود پایان نامه شیمی ... پایان نامه بررسي عوارض ... پایان نامه بررسي اثر عفونت مزمن ...

پایان نامه های دانلودی رشته پزشکی – درج بک لینک دائمی

پایان نامه بررسي ... دانلود پایان نامه دکترا : ... پستان و عفونت های انسانی; دانلود ...

دانلود رايگان پايان نامه دامپزشکي رشته علوم آزمايشگاهي

دانلود رايگان پايان نامه دامپزشکي رشته علوم آزمايشگاهي 1 . پایان نامه دامپزشكی رشته علوم آزمایشگاهی دامپزشكی | مرجع دانلود پایان ...

بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما ...

لینک دانلود بعد از خرید نمایش داده شده و به ایمیلتان ارسال می شود. با اطمینان خرید کنید. پشتیبانی خرید آماده پاسخگویی به شما می باشد.

عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيديس ...

بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ... نامه دامپزشکی پایان نامه دکترا ... دانلود تحقیق ...

بایگانی‌های پایان نامه دامپزشکی | فروشگاه ویکی فایل

دانلود پکیج درآمدزایی ۴۰۰هزارتومن ناچیز در ۴۰دقیقه (فوق العاده ویژه جهت کمک به شما)

پایان نامه های دانلودی رشته پزشکی – درج بک لینک دائمی

پایان نامه بررسي ... دانلود پایان نامه دکترا : ... پستان و عفونت های انسانی; دانلود ...

پایان نامه بررسی طراحی سایت شرکت به سبا

ذخیره شده دانلود پایان نامه بررسي تأثير گزارشگري ... (بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ...

پایان نامه بررسی طراحی سایت شرکت به سبا

ذخیره شده دانلود پایان نامه بررسي تأثير گزارشگري ... (بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ...

دانلود رايگان پايان نامه دامپزشکي رشته علوم آزمايشگاهي

دانلود رايگان پايان نامه دامپزشکي رشته علوم آزمايشگاهي 1 . پایان نامه دامپزشكی رشته علوم آزمایشگاهی دامپزشكی | مرجع دانلود پایان ...

پایان نامه بررسی اثر ویتامین A بر افزایش كارآیی واكسن ضد ...

دانلود پایان نامه دکترا بررسي اثر ويتامين A بر افزايش كارآيي واكسن ضد كوكسيديوز در جوجه هاي گوشتي در 54 صفحه ورد قابل ویرایش آماده ارائه با فرمت doc

تحقیق درباره بهشت ناشناخته مافارون؛ خزانه پنهان

مقاله درمورد آثار ادبي سهراب

تحقیق درباره بسياري از بچه ها عاداتي دارند كه

تحقیق درباره بسياري از بچه ها عاداتي دارند كه

فایل فلش گوشی چینی dok model d208

کارآموزی طراحی واحدهاي صنعتي

کنترل ولتاژ در میکرو شبکه شامل توربین های بادی

استاندارد و برنامه فيزيكي فضاها

شیمی و فناوری غلات

کنترل ولتاژ در میکرو شبکه شامل توربین های بادی